赵老师是郑州大学在校研究生，老师在我司买了相应的抗体自己包被ELISA试剂盒。也是刚刚接触ELISA实验的新手，研究大鼠干扰素相关指标的实验，做完大鼠γ干扰素ELISA实验后反应标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显，但是显色比较浅，随着时间延长（大概6、7分钟）以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。特咨询我司技术帮忙分析原因所在。

我司技术分析：

1、刚加完显色剂时梯度明显：显色液可能是从高浓度向低浓度孔加的。

2、酶浓度太高，导致zui后显色结果都是高的

3、包被-酶标系统不匹配或者酶标的非特异反应太强，或者酶标仪读数范围不够，

4、样本中有能够催化底物的物质，没洗下来。

5、建议：包被、酶标重新做梯度，先用较低的浓度把梯度摸索好，然后再优化灵敏度，zui后调出所需的灵敏度、线性范围

6、有条件的话，可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上，加完底物三分钟读数。

7、蛋白系统灵敏度够的话，显色十分钟就差不多了。

8、酶是自己标的这种情况的，HRP比例不要太高。