什么是培养基灭菌？为什么要灭菌？给培养基灭菌的方法有很多，如干热灭菌、湿热灭菌等。大多数的培养基灭菌都是使用湿热灭菌法了，今天上海恒远与您共享培养基湿热灭菌操作方法。

一、热灭菌的主要原理

    1.微生物的热阻

    2.对数残存定律

    3.理论灭菌时间的计算

    4.灭菌温度的选择

二、影响灭菌效果的因素

    1.微生物种类：不同的微生物k值不同。

    2.初始菌量：在保持N值不变的前提下，t与初始菌量N0的对数成正比。

    3.培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。

    4.传热与混合状况：影响受热均匀度。

    5.培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。

    6.蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭菌温度。

    7.pH：酸性pH下可加快微生物热死速率

三、培养基的工业灭菌

    1.实验室种子培养基灭菌方法

    ①高压蒸汽灭菌锅、 手提式灭菌锅。容量小。

    ②立式或卧式灭菌锅，容量较大，一般能装几十瓶或几百瓶。

    ③灭菌柜，要和蒸汽锅炉配套， 用于大量种瓶培养基的灭菌， 一次能装几百至几千瓶(袋)。

    2.培养基的分批灭菌

    ①定义：将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方式，又称实罐灭菌。

    ②灭菌过程

    过程包括升温、保温和冷却等三个阶段，各阶段对灭菌的贡献：20%、75%、5%。培养基的升温可由两种方式实现：间接加热，在夹套或蛇管中通入蒸汽加热；直接加热，在培养基中直接通入热蒸汽加热。

    灭菌过程中加热和保温阶段的灭菌作用是主要的，而冷却阶段的灭菌作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。此外，还应指出的是，应当避免长时间的加热阶段，因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。

    在实际生产中，也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况，这时可以适当延长灭菌时间。生产上甚至有用100℃蒸煮而达到*灭菌的实例。如要做固体曲而没有高温蒸汽时，可将原料用100蒸汽蒸30min，杀死其中的营养细胞，但孢子与细菌的芽孢没有被杀死。

    将蒸过的原料置于室温下过夜，未被杀死的孢子便发芽生长，芽孢发育成营养细胞，再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次，亦可达到*灭菌的目的。

    3.分批灭菌的操作

    分批灭歇是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的，它是在配制罐中配好培养基后，通过管道输入发酵罐等培养设备中，然后开始灭菌。在进行培养基的间歇灭菌之前，通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行灭菌，并且用空气将分过滤器吹干。开始灭菌时，应先放去夹套或蛇管中的冷水，开启排气管阀，通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热，同时，也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。

    当培养基温度升到70℃左右时，从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热，当温度升至120℃，罐压为1 105Pa（表压）时，打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排汽，当然在保温过程中，应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽，这样才能不留死角，从而保证灭菌*。保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。

    由于培养基的间歇灭菌不需要专门的灭菌设备，投资少，对设备要求简单，对蒸汽的要求也比较低，且灭菌效果可靠，因此，间歇灭菌是中小型生产工厂经常采用的一种培养基灭菌方法。

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