NAD+和 NADH 的提取操作步骤
时间:2024-09-29 阅读:181
NAD+和 NADH 的提取操作步骤:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。