免疫组化，免疫组织化学技术(immunohistochemistry)，是一项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。

免疫组化常见问题解答：

1、染色过强

　　a、 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜 。

　　b、 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度。

　　c、 DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准。

2、非特异性背景染色

　　a、 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3次每次5分钟。

　　b、 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长。

　　c、 组织中含内原性生物su 正常非免疫动物血清再封闭。

　　d、 血清蛋白封闭不充分 延长血清蛋白封闭时间。

3、染色弱

　　a、 抗体浓度过低、孵育时间过短 提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟。

　　b、 试剂超过有效使用时间 应更换试剂。

　　c、 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液使试剂稀释 （应防止切片干燥）。

　　d、 室温太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜。

　　e、 蛋白封闭过度 封闭不要超过12分钟。

4、染色阴性 

　　a 、操作步骤错误 应重试 设阳性对照。

　　b、 组织中无抗原 设阳性对照以验证试验结果。

　　c、 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗二抗种属无误。