细胞传代问题分析：

　　1、传代密度过高

　　一旦细胞养太久至融合度过高(>90%)才传代，容易使细胞产生老化现象，甚至是堆叠，再消化细胞时不易吹打成单颗细胞，即便再重新铺盘传代，细胞也无法回到原本的特性了。(如：单层细胞，没长满就发生堆叠现象)。

　　解决方案：

　　尽量避免融合度过高，镜下观察融合度约达到80%即可传代分盘。

　　细胞融合度：在细胞培养中指的是细胞在培养表面(培养皿/瓶)所占的比例。

　　2、传代密度过低

　　哺乳动物贴壁培养细胞，若细胞培养到80-90%密度需要开始传代，在传代接种细胞密度过低，细胞间距离太远，就无法在细胞间产生黏附及通信作用，帮助信号传导并活化细胞；总体细胞量不足，分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境，以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。

　　解决方案：

　　细胞传代时，要进行准确的细胞计数，确保铺盘的密度。

　　3、冻 存

　　细胞冻存的基本原理：慢冻

　　手动降温：将细胞依序放在4℃(30分钟)、-20℃(1小时)、-80℃(过夜)后移至液氮中保存。

　　程序降温盒：是一般广泛使用的降温法，为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热)，使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃(过夜)，然后移至液氮中保存。

　　由此可以看出，程序降温精准度更高，优于手动降温。

　　部分低温保护剂在缓慢冷冻过程中虽然会保护细胞，但它们也会引起细胞毒性，尤其是在室温下。因此，在标准的自制冻存液中，会含有血清，血清是用来降低细胞毒性的，但血清也不是完整的。