人抗红细胞抗体,RBCELISA试剂盒
使用说明书elisa法测定

规格：48T/96T

本试剂盒仅供体外研究使用!

ELISA法定量测定人尿液或其它相关生物液体指标的含量。

实验原理 

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗指标抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 

人抗红细胞抗体,RBCELISA试剂盒 试剂盒组成及试剂配制 

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 

需要而未提供的试剂和器材 

1. 标准规格酶标仪 

2. 高速离心机 

3. 电热恒温培养箱 

4. 干净的试管和Eppendof管 

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器 

6. 蒸馏水，容量瓶等 

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：2瓶。 

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 

标本的采集及保存  

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 

标本的稀释原则： 

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 U/L，做系列倍比稀释后，分别稀释50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，1.56 U/L，0.78 U/L，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/L，临用前15分钟内配制。 

如配制25 U/L标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50 U/L的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。