有关反映试剂质量的指标试剂空白吸光度讲解
时间:2021-07-16 阅读:1397
试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标,但不能反映试剂质量的全部。试剂成份、纯度、用量及稳定性,才是保证试剂质量的关键所在。目前市售的一些试剂具有抗干扰作用,主要是通过加入抗干扰物质或使用新的色素原以避免内源性物质的干扰。但值得注意的是:一些试验项目在消除内源性物质干扰的同时,会带来样品含量真实性的变化。
每种试剂都有一定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应,在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上,吸光度上升的反应,其试剂空白吸光度越低越好,不能超过一个高限;相反,吸光度下降的反应,其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此,试剂空白吸光度限值,常作为程序参数输入仪器,如经核查超限,仪器会自动报警,提示更换试剂。需要指出的是,还原型辅酶I(或II)等投料量不足或劣质的原料,往往需要加大用量,才使“表观”吸光度上升,凑合过试剂空白核对的“关”,其后果为如下情况:
1)、线性范围变窄 现象:高值测不高。原因:试剂时有效成分投料量不足;试剂成份稳定性较差。
2)、灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。原因:试剂底物浓度不足。
3)、低值偏高 现象:试剂空白的变化曲线(吸光度VS时间)明显波动。原因:试剂自身不稳定,自行分解;工具酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰作用。
丙烯葡聚糖凝胶S-200 HR,Sephacryl S-200 High resolution每种试剂都有一定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。抚生生物这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应,在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。
反应中抗Vc干扰问题:由于维生素c易氧化,样品中Vc会竞争反应生成的过氧化氢,而产生负干扰。上海抚生生物因此,在试剂R1中加入抗坏血酸氧化酶,这种方法是有效的,但不一定有很大的意义。因为Vc干扰必须同时具备二个条件:丙烯葡聚糖凝胶S-200 HR,Sephacryl S-200 High resolutiona)Vc摄入量较多;b)采血后立即测定。实验表明离体血清中Vc在90 min后会全部被氧化。又如,使用胺类新色原。分子共轭结构特性使得灵敏度提高,相应可以减少样本用量,较终能有效地降低干扰物的量.b)使生成胺类色素原较大吸收峰由500~520 nm移至550 nm以上,以避开黄疸、溶血干扰。如:亚铁一H 0 ,能有效避免黄疸干扰的理论依据是亚铁与H。0。亲和力远远大于胆红素。甘油三酯测定,有人主张选用双试剂方法消除内源性甘油,这个方法是可行的,但忽视了一个化学平衡理论。因为所有的酯在水溶液中都不是简单地以酯的形式存在,而是以水解与酯化相平衡的形式存在。抚生生物 在一个平衡体系中,如果去除游离甘油,这个平衡就向生成甘油方向移动,甘油三酯就会重新水解,生成新的甘油,达到新的平衡,因此样品与R1试剂孵育时间越长,测得甘油三酯值就越低。
甘油三酯测定,不仅要去除游离甘油,而且还要克服样本含量真实性发生的变化,试剂中必须加入甘油激酶,并且延迟时间要标准化。所以,一些试验项目在消除内源性物质干扰的同时,会带来样品含量真实性的变化。