进口ELISA试剂盒实验原理与步骤
时间:2020-12-09 阅读:454
进口ELISA试剂盒实验原理:
进口ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被植物淀粉(Amy)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物淀粉(Amy)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度
进口ELISA试剂盒实验步骤:
一、准备
1. 原辅料的处理: 根据药材的有效成分不同,可采用不同的溶剂和方法进行提取,一般多用煎煮法提取有效成分,用等量乙醇精制时放置的时间、回收乙醇后放置的时间可根据实验安排情况,适当延长,以沉淀*,上清液易于分离为宜。
2. 制颗粒:掌握湿法制粒的操作方法。控制清膏的相对密度时由于量较小,不方便用比重计测量,也可用桑皮纸上测水印的方法适当掌握,以不出现、或仅有少量水印为度;加辅料的量一般不超过清膏量的5倍,以手握之成团,触之即散即可;如果软材不易分散,可用乙醇调整干湿度,以降低黏性,易于过筛,并使得颗粒易于干燥。
3. 干燥与整粒:湿颗粒立即在60~80 ℃常压干燥。整粒后将芳香挥发性物质、对湿热不稳定的药物加到干颗粒中。
4. 颗粒剂易吸潮变质,为保证颗粒剂质量,应选择适宜的包装材料进行包装。
二、具体操作
将大清叶,板蓝根,连翘,拳参四味,加纯化水煎煮2次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度约为1.08(90~95 ℃),待冷至室温,加等量的乙醇使沉淀,静置;取上清液浓缩至相对密度1.20(60~65 ℃),加等量的水,搅拌,静置8小时,取上清液浓缩成相对密度为1.38~1.40(60~65 ℃)的清膏。取清膏1份、蔗糖粉3份、糊精1.25份及乙醇适量,制成颗粒,干燥,即得。
进口ELISA试剂盒注意事项:
1. 为使成品纯净,提取液浓缩至相对密度约为1.08加等量的乙醇使沉淀,以除去树胶,蛋白等杂质,同时便于制粒。
2. 制备的糖粉需600 °C干燥,除去结晶水