在完成BHK-21仓鼠肾细胞的传代培养后，需进一步观察细胞状态并开展后续实验。以下为关键操作步骤的延续：

细胞冻存

若需长期保存细胞，建议在细胞对数生长期进行冻存：

1. 消化收集细胞，离心后弃上清，用预冷的冻存液（含10% DMSO的培养基）重悬细胞，调整密度至1×10⁶~5×10⁶/mL。

2. 分装至冻存管，标注细胞名称、代次及日期。

3. 采用程序性冻存盒或分步降温法（4℃ 30min → -20℃ 1h → -80℃过夜），最后转移至液氮长期保存。

细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中摇晃至融化（1~2分钟内完成）。

2. 将细胞悬液转移至含5mL预温培养基的离心管，1000rpm离心5分钟，弃上清。

3. 用新鲜培养基重悬细胞，接种至培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱。24小时后更换培养基以去除残留DMSO。

实验注意事项

- 无菌操作：全程在超净台内进行，避免污染。

- 状态监测：每日观察细胞形态，若出现颗粒增多、空泡化或脱落，需排查培养基、消化时间或污染问题。

- 代次控制：BHK-21细胞通常建议使用30代以内，高频传代可能导致特性改变。

常见问题与解决

- 细胞贴壁不良：检查培养瓶表面是否涂覆胶原蛋白，或调整血清浓度至10%~15%。

- 污染处理：立即丢弃污染细胞，消毒操作台，更换试剂并重新复苏备份细胞。

通过规范操作和定期维护，可确保BHK-21细胞的稳定性和实验结果的可靠性。后续可根据研究需求进行转染、病毒培养或药物筛选等实验。

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