α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)样本的前处理
时间:2021-08-26 阅读:526
α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
①称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆 器或研钵匀浆。
②将匀浆600g,4℃离心5min。
③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。
⑤在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W, 超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体α-KGDH活性测定。
测定原理:α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
磷酸化动力相关蛋白1抗体
DNA连接酶4抗体
二肽基肽酶6抗体
二氢叶酸还原酶抗体
有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体
有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体
DOM3Z蛋白抗体
蓬乱蛋白2抗体
磷酸化蓬乱蛋白2抗体
转录下调蛋白1抗体
脱氢酶/还原酶家族成员2抗体
牙本质磷蛋白抗体
Dermokine β蛋白抗体
DPCR1蛋白抗体
表皮乳头源性蛋白6抗体
双特异性蛋白磷酸酶7抗体
双特异性蛋白磷酸酶26抗体
阿米洛利结合蛋白1抗体
S期激酶活化蛋白DBF4A抗体
着丝粒相关蛋白DSN1抗体
双皮层蛋白结构域蛋白DCDC2抗体
神经干细胞树突调节蛋白DAGLα抗体
对接蛋白4抗体
DULLARD蛋白抗体
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MNB抗体
无胸腺症相关蛋白DGCR6/迪格奥尔格综合征关键基因6抗体
朊蛋白DPL抗体
肌强直性营养不良蛋白激酶抗体
有丝分裂控制蛋白dis3抗体