鱼活性氧（ROS）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

12 IU/ml -360 IU/ml

使用目的： 本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中活性氧（ROS）含量。

实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼活性氧（ROS）水平。用纯化的鱼活性氧（ROS）

抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入活性氧（ROS），再与 HRP 标记的活性氧（ROS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜 色的深浅和样品中的活性氧（ROS）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鱼活性氧（ROS）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤

1.    标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。  鱼活性氧（ROS）酶联免疫分析试剂盒

2.    加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.    配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.    温育：操作同 3。

8.    洗涤：操作同 5。

9.    显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。  鱼活性氧（ROS）酶联免疫分析试剂盒

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD  值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。 注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。  鱼活性氧（ROS）酶联免疫分析试剂盒

2．有效期：6 个月