使用TNF试剂盒的检测原理及注意事项
时间:2016-11-29 阅读:759
注意事项:
1.tnf试剂盒请保存在2~8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶,请水浴加热使结晶*溶解后再配制工作液。
3.若标准品复溶后,请在三天内用完。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时,请及时更换枪头,避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应,请严格控制在25~28℃。
9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长。
TNF试剂盒的检测原理及使用注意
检测原理: TNF试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度。TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的TNF-α会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人TNF-α抗体后,抗人TNF-α抗体与TNF-α接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。zui后加入显色剂,若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,TNF-α浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中TNF-α浓度。