白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒包含了蛋白提取试剂及SDS－PAGE凝胶电泳所需的试剂。其中包括RIPA裂解液，BCA蛋白定量试剂，5×蛋白上样buffer，预染的蛋白Marker和 SDS-PAGE凝胶电泳试剂。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
BCA蛋白浓度测定试剂zui常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。BCA法测定蛋白浓度灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，zui小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。

    在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
SDS-PAGE凝胶配制试剂提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶了。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒约可配制25块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。
应用方面：可用于Western Blotting中的蛋白提取和电泳的全过程。
 

二、试剂盒组份

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液               

1 ml

-20℃

预染蛋白分子量 Marker（14.4-116KD）

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

    手术剪，玻璃匀浆器，细胞刮，摇床，eppendorf管，涡旋振荡器，微型高速冷冻离心机，分光光度计或酶标仪，酶标板，电泳装置，1.5m L离心管，100mMPMSF，冰冷PBS，去离子水

四、保存条件：

    RIPA裂解液（强），5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，预染蛋白分子量 Marker（14.4-116KD）-20℃保存

蛋白标准溶液-20℃保存，BCA试剂A和BCA试剂B室温保存。

    1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (过硫酸铵)和1M Tris-HCl, pH6.8室温或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。

    过硫酸铵配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解），分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。

 五、      操作规程

（1）用RIPA裂解液提取蛋白

注意事项：

1、   为取得的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、   需自备PMSF。

3、   裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、   有的样本要通过一些预实验来摸索的适合您实验条件的裂解液。

5、   一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用透析液透析后进行后续分析。

6、   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒说明书

(一)        对于细胞

1、   RIPA裂解液（强）工作液的准备

 在每mL 冷RIPA裂解液（强）加入10μL 100mM PMSF混匀。冰上保存数分钟待用。

2、   样品的处理

A、  悬浮细胞

a、    离心（2000rpm，5min）收集细胞，尽zui大努力吸尽上清。

b、  用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

c、    转入第3步进行操作。

B、  贴壁细胞

a、    培养好的细胞吸去培养基后，加入10mL冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液。

b、   用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液（不含胰酶）处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。

c、    将细胞溶液转至新的冰冷离心管中，离心（2000rpm，5min）吸尽上清。

d、  用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

e、    转入第3步进行操作。

3、   加入上述配制好的冷RIPA裂解液（强）工作液加入量如下表所示：