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单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别?
抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,因而使机体产生好几种不同的抗体,zui终产生出抗体是浆细胞。只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系,纯系的英文为Clone,音译就是克隆。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就象导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。
zui初有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分,故曾把抗体统称为丙种(γ)球蛋白。后来发现,抗体并不都在γ区;并且位于γ区的球蛋白,也不一定都具有抗体活性。
1964年,世界卫生组织举行专门会议,将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig),如骨髓瘤蛋白,巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构化学的概念,而抗体是生物学功能的概念。可以说,几乎所有抗体都是免疫球蛋白(极少数抗体为RNA),但并非所有免疫球蛋白都是抗体。
蛋白质与多肽的:
多肽:通常由10~100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽,它们的分子量低于10,000Da(Dalton,道尔顿),能透过半透膜,不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。也有文献把由2~10个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽);10~50个氨基酸组成的肽称为多肽;由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。
蛋白质:生物体中广泛存在的一类生物大分子,由核酸编码的α氨基酸之间通过α氨基和α羧基形成的肽键连接而成的肽链,经翻译后加工而生成的具有特定立体结构的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定顺序结合形成一条多肽链,再由一条或一条以上的多肽链按照其特定方式结合合而成的高分子化合物。
就是:都是由20种基本氨基酸通过肽键连接而成的。
多肽与蛋白质的区别:
蛋白质的结构层次可简写为:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽链)→蛋白质。多肽与蛋白质是不同的两个层次,区别如下:
①多肽和蛋白质的结构有差异。多肽仅仅是蛋白质的初级结构形式,而蛋白质具有一定的空间结构。蛋白质是由多肽和其他物质结合而成的,一个蛋白质分子可由一条肽链组成(如高等动物的细胞色素c是由104个氨基酸残基的一条肽链组成),也可由多条肽链通过一定的化学键(肯定不是肽键,如二硫键、氢键等)连接而成(如胰岛素由2条肽链组成、胰凝乳蛋白酶是由3条肽链组成、血红蛋白分子由4条肽链组成、免疫球蛋白分子由4条肽链组成等)。
②多肽与蛋白质的功能有差异。多肽往往是无生物活性,而蛋白质是具有生物活性的。多肽一般无活性(如蛋白质在胃、小肠中经消化产生的多肽),少数有活性(如抗利尿激素就是多肽类激素),与蛋白质相比,多肽的分子量较小,没有空间结构,一般无活性;蛋白质的分子量较大,有空间结构,有活性(变性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
因此,一条刚从核糖体中合成的多肽链实际上不能称为蛋白质。
多肽合成:
是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了经典液相合成法*的优点,从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种:固相合成和液相多肽合成。
单克隆抗体:
(monoclonal antibody,McAb)克隆选择学说:淋巴细胞在与抗原接触前就已经存在多种多样的与抗原专一性结合的受体,一种细胞带一种受体,进入机体的抗原选择性的结合其中的个别淋巴细胞,使之活化,增殖产生大量带有同样受体的细胞群,分泌同样的抗体。当抗原进入体内,在机体中就会诱导出针对不同抗原决定簇的多种抗体,如果要把这些抗体一一分开,用现有的生物化学或物理化学方法是根本办不到的。1975年科勒(Kohler)和米尔斯坦(Milstein)将小鼠免疫细胞与肿瘤细胞融合,培养出既能迅速生长无限繁殖又可分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。从而获得针对某一特殊抗原决定簇的单克隆抗体。1995年,Katherine Knight博士在美国芝加哥Loyola大学成功地从转基因兔中获得了骨髓瘤细胞(Plasmacytoma),开创了兔单克隆抗体技术。与鼠单抗相比,兔单抗具有:首先,兔抗血清通常含有高亲和力抗体,可以比鼠抗血清识别更多种类的表位;其次,兔单克隆抗体能够识别许多在小鼠中不产生免疫的抗原;第三,由于兔脾脏较大,可以更多进行的融合试验,使得高通量筛选融合成为可能。
标记抗体:
抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体,是免疫电镜样品制备的一种方法,用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。
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