大鼠类风湿因子（RF）定量检测试剂盒（ELISA）
使用说明书
仅供科研使用，不得用于医学诊断。
使用前仔细阅读本说明书。
用途： 用于定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中类风湿因子（RF）的
含量。
工作原理
本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中大鼠类风湿因
子（RF）的水平。向预先包被大鼠类风湿因子（RF）抗体的酶标孔中加入标准品、
待测样本和HRP 标记的类风湿因子（RF）抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的
组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色
的深浅与样品中大鼠类风湿因子（RF）的浓度呈正相关。
试剂盒组成
1 标准品（100ng/ml） 0.5ml 7 显色剂A 液6ml
2 标准品稀释液6mL 8 显色剂B 液6ml
3 酶标包被板12 孔×8 条9 终止液6ml
4 酶标试剂6ml 10 说明书1 份
5 20×浓缩洗涤液25ml 11 封板膜2 张
6 样品稀释液6ml 12 密封袋1 个
注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：100、50、25、12.5、6.25、0 ng/ml
需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 蒸馏水，
5． 一次性试管
6． 吸水纸
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30 分钟。酶标包被
板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 建议所有标准品、样本都做双份检测。
4． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
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6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7． 底物B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用
力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml 注入孔内，浸泡1-2 分钟。根据需要，重
复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求www.hfswsj.com

1．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作程序
1． 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品
孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板
上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释
度为5 倍）。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育
60 分钟。
2． 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸
拍干。如此重复5 次，拍干。
3． 每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
4． 取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
5． 测定：以空白孔调零，在450nm 波长下测量各孔的吸光度值（OD 值）。测定
应在加终止液后15 分钟以内进行。
6． 根据标准品的浓度及对应的OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样
品的OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来
计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
操作程序总结：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品、标准品和酶标试剂，37℃反应60分钟
洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟
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