维生素 C 检测试剂盒(磷钼酸微板法)的产品介绍

产品简介：

维生素 C(Vitamin C)又称 L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素 C 是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。Vc 有L-型和 D-型两种异构体，只有 L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

维生素 C 检测试剂盒(磷钼酸微板法)检测原理是在强酸和偏磷酸根离子存在条件下，钼酸铵能与还原型维生素 C 反应生成蓝色化合物，在一定浓度范围吸光度值与浓度呈线性关系，以酶标仪 760nm 处检测吸光度，获得 Vitamin C 含量。该试剂盒主要用于植物组织中的还原型维生素 C(抗坏血酸)的检测，其优点是：1、反应迅速；2、操作简便；3、还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，专一性好。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研磨器或匀浆器

3、离心机、离心管或试管、水浴锅或恒温箱、酶标仪、96 孔板

操作步骤(仅供参考)：

1、配制组织匀浆液：按组织匀浆液 A:组织匀浆液 B:蒸馏水=8:1:91 的比例混匀即得。

2、准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量 1g，加入研磨器

内，再加入少量组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用组织匀浆液研磨，最后一并倒入 10ml 离心管，补充组织匀浆液至 10ml，充分混匀，4000r/min 离心 5min，取 0.05ml 上清液，加入等量蒸馏水，即为待测液。

3、配制 MPA 工作液：称取 0.3g MPA 粉末，充分溶解于 10ml 酸性缓冲液Ⅰ中，也可根据使用情况称取一定量的 MPA 按比例溶解即可，4℃保存 3~4 天有效。

4、配制 Vitamin C Assay buffer：取钼酸铵粉末 0.5g，充分溶解于 10ml 蒸馏水中，也

可根据使用情况称取一定量的钼酸铵加水按比例溶解即可，4℃避光保存。注意：钼酸铵溶于水会逐渐变化成乳白色浊液，则不能使用。

5、配制系列 Vitamin C 标准：将 25mg Vitamin C 标准用 1ml 组织匀浆液溶解即得

Vitamin C 标准(25mg/ml)，再用蒸馏水稀释成 Vitamin C 标准(250ug/ml)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。Vitamin C 标准(25mg/ml)放置-20℃，短期保存。

6、Vitamin C 加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的 Vitamin C 含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行孔，求平均值。

7、Vitamin C 测定：立即混匀，30℃水浴 20min，空白调零，以酶标仪测定 760nm 处系列标准孔、测定孔的吸光度。

计算：以系列标准 Vitamin C (50、75、100、125、150、200、250μg/ml)为横坐标，

以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以测定孔的吸光度代入回归方程

求得样品维生素 C 含量。

100g 样品中维生素 C 含量(mg)

=(c0×V1)×100/(m1×1000)=(c0×V1) /(m1×10)

式中：c0 :待测样品的吸光度值在标准曲线上查出的维生素 C 的浓度(μg/ml)

V1 : 待测液的总体积(ml)

m1 : 样品质量(g)

1000 : μg 换算成 mg

注意事项：

1、 Vitamin C 标准避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 组织匀浆液 A 保存温度过低时易产生结晶，可用温水浴溶解后再使用。

3、 Vitamin C Assay buffer 室温保存时间过长或者过期会出现白色粘稠物，不可使用，应换新的产品使用。不使用时建议 4℃保存。

4、 待测样品如不能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定。

5、 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

有效期： 6 个月有效。常温运输和保存。

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