MMP-2&MMP-9明胶酶谱法检测试剂盒检测原理
时间:2023-12-06 阅读:389
简介:
基质金属蛋白酶 (Matrix metalloproteinase ,MMP) 属于金属蛋白酶家族,该家族由至少 20 个成员组成,并且已知参与细胞外基质蛋白的代谢。它们以无活性的酶原形式分泌,活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白,又称胶原酶。通过影响细胞外基质,胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程,并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程,其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。MMP 可通过酶谱法广泛检测。MMP2 & MMP9 Gelatin-Zymography Kit提供了一个简单的酶谱电泳系统,用于检测血液、体液、分泌物、细胞裂解液、细胞培养基等样品中的MMP2,MMP9酶谱及活性。
检测原理:
本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合,导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育,MMP恢复活性,凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行25-50次标准小胶检测(如果样本MMP含量高,孵育时间短,不用换液可最多50次),如果小胶加样孔为10~15个,则总计可最多检测500~750个样品。
检测目的:
本试剂盒用于检测组织、细胞中MMP-2、MMP-9 酶谱活性及其前体酶原酶谱。