背景

本试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体等样本中1,5-脱水葡萄糖醇1,5-脱水山梨的含量。

实验原理：

大鼠试剂盒 1,5-脱水葡萄糖醇1,5-脱水山梨是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被1,5-脱水葡萄糖醇1,5-脱水山梨捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的细1,5-脱水葡萄糖醇1,5-脱水山梨呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

ELIS试剂盒检测过程中的注意事项：

液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。底物是光敏感的，要在临用前现配。检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。待检样品要澄清，否则会影响结果。温浴时间应遵守试剂盒规定。应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

ELISA试剂盒中手动洗板操作指南：

当洗涤缓冲液有结晶析出时，可将试剂瓶置于50°C水浴或培养箱中，使结晶物充分溶解再配制。加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制，以免被其他试剂污染，或染菌。洗板通常3~4次，加好洗液后轻轻摇动微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍干，选用无粉尘和碎屑的吸水纸。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁。不能让样品干太久。

酶标板拍干后立即做后续的加液。拍板用的吸水纸可选择厨房用纸，吸水性好且无碎屑。为保证微孔洗液浸泡时间一致，可采用从前至后和从后至前的顺序交替加洗液的方法。通过预实验可以熟悉整个实验的流程，发现可能忽略的问题；可以测试样本和试剂盒是否匹配，一旦出现不匹配的情况，不至于浪费过多样本；可以对样品中目的分析物的浓度作一下大致参考，以确定合适稀释度。

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