ELISA试剂盒用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测 HBsAg 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg 的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg 的含量标明为P=9±2ng /ml。每次试验设2 个阳性对照和3 个阴性对照。
    测得A 值后，先计算阴性对照A 值的平均数（NC X ）和阳性对照A 值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）必须大于一个特定的数值（例0.400），试验才有效。3 个阴性对照A 值均应≥0.5×NCX，并≤1.5 ×NCX，如其中之一超出此范围，ELISA试剂盒则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A 值超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：
阳性判定值=NCX+0.05 
标本 A 值＞阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。应注意的是，式中0.05 为该试剂盒的常数，只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。
根据以上叙述可以看出，在这种方法中阴性对照和阳性对照也起到试验的质控作用，试剂变质和操作不当均会产生"试验无效"的后果。
b.标本/阴性对照比值在竞争法ELISA试剂盒中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量，一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5 之间，此时反应zui为敏感。竞争法 ELISA 不易用自视判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，一般均用比色计测定，读出S、P 和N 的吸光值。计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。