在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使ELISA试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。

       即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA试剂盒双抗体夹心法及ELISA试剂盒间接法。

ELISA试剂盒使用应注意以下几点：

1 洗板前，应检查洗液瓶、蒸馏水瓶是否充足，废液瓶是否满瓶。

2 在自检过程中注意观察洗液灌注是否通畅，排液是否通畅。

3在洗板过程中，应注意观察反应孔每孔是否灌满且无外溢，每孔吸水是否吸尽，并且要保证洗液在孔中放置的时间。如果手工洗板的话就更需要操作者的操作技巧。