无血清培养基的使用方法
时间:2019-12-27 阅读:700
目前,血清仍是动物细胞培育中zui根本的的增加物,尤其是在原代培育或者细胞成长状况不良时,常常会先使用有血清的培育液进行培育,待细胞成长旺盛今后,再换成无血清培育液。细胞转入无血清培育基培育要有一个习惯过程,一般要逐渐降低血清浓度,从10%削减到5%,3%,1%,直至无血清培育。
降低过程中要留意观察细胞形态是否发生改变,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还坚持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再持续保留,很少有细胞能够长期培育于无血清培育基而不发生改变的。细胞转入无血清培育之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培育于含血清的培育基中,以保证细胞的特性不发生改变。
为了使细胞习惯无血清培育,关键的是使所培育细胞:
1.处于对数成长中期
2.>90%活细胞率
3.习惯时以较高的开始细胞接种
建议备份前一次混合培育的培育物,直到每一次细胞习惯了新的混合培育基。每一次削减血清前,可能需求在SFM/有血清混合培育基中进行几回传代。
在习惯过程中,不要让细胞成长过度。这将增加挑选亚群的可能性。需求留意,与有血清培育基相比,大部分SFM包括十分少的蛋白质,因此更易于受外界因素的影响。
细胞习惯无血清培育基的方法
1.直接习惯——细胞从增加血清的培育基转换到无血清培育基(SFM)中。
一些类型细胞可直接从包括血清的培育基习惯无血清培育基。关于直接习惯,接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度到达1×106~3×106细胞/ml时,传代培育细胞。当细胞密度在培育4到7天后到达2×106~4×106细胞/ml时,细胞*习惯了无血清培育基。每隔3~5天,当细胞密度到达1×106~3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的习惯了无血清培育基的细胞培育物应该再次传代培育。
2.接连习惯——分好几步把细胞从增加血清的培育基转换到无血清培育基(SFM)中,与直接习惯相比较,接连习惯趋向关于细胞愈加温文一些。
(1)以2倍正常接种密度接种成长活跃的细胞培育物到75%有血清培育基:25%SFM混合培育基中,传代培育。
(2)当细胞密度>5×105细胞/ml时,以2×105到3×105细胞/ml细胞密度,在有血清培育基:SFM为50∶50的混合培育基中传代培育。
(3)以2×106到3×106细胞/ml细胞密度,25%有血清培育基和75%SFM中传代培育。
(4)当细胞密度到达1×106到3×106细胞/ml(接种后4到6天),在100%SFM培育基中传代培育。
(5)每隔3到5天,当细胞密度到达1×106到3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的习惯了无血清培育基的细胞培育物应该再次传代培育。