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大鼠Acrp30elisa试剂盒的样本要求:
1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。
大鼠Acrp30elisa试剂盒操作常见问题:
1.边缘效应使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应",即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应",并且可提高测定的重复性。
2.加样,在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
实验中需注意的五个方面:
1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、*标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、*标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
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