1.如何选用特殊细胞系培养基? |
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始,各种目的无血清培养AIM V(12005)培养基(SFM)。
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2.L-*在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
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L-*在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-*可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-*在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有zui终定论。L-*的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。
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3.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
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GlutaMAX-I 二肽是一个L-*的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-*来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-*供利用。
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GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解,如果在相同条件下,L-*几乎*降解。
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4.什么培养基中可以省去加酚红?
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酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
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酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
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5.如何用台盼兰计数活细胞?
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用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升,在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞。
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6.如何消除组织培养的污染?
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当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
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