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原代组织细胞的解离

时间:2015-08-13      阅读:364

胶原酶
    1.用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用Hanks*(HBSS)将组织碎块清洗数次。
    2.加入胶原酶(50-200单位/ml胶原酶HBSS)。
    3.在37 下孵育4-18小时。加入3mM CaCl2 可以提高解离效率。
    4.用灭菌的不锈钢网或尼龙网过滤细胞悬浮液,将离散的细胞和组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离,可向组织片段中加入新鲜的胶原酶。
    5.通过离心HBSS清洗细胞悬浮液数次。
    6.用培养基重悬细胞。计算细胞个数,然后接种细胞进行培养。

分散酶
    1.用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用不含钙镁离子的*清洗组织碎块数次。
    2.加入分散酶(0.6-2.4单位/ml分散酶不含钙镁的*)。
    3.在37下孵育20分钟至数小时。
    4.用灭菌的不锈钢网或尼友网过滤细胞悬浮液,将离散的细胞和组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离,可向组织片段中加入新鲜分散酶。
    5.通过离心*清洗细胞悬浮液数次。
    6.用培养基重悬细胞。计算细胞个数,然后接种细胞进行培养。

*
    1.先去除无关组织,然后用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。通过在不含钙镁的*进行重悬来清洗组织碎块。待组织碎块沉降后去掉上清液。重复清洗2-3次。
    2.将装有组织碎块的容器置于冰上,去掉所有上清液。在不含钙镁的*中加入0.25%*(每100mg组织大约需要1ml *)。
    3.在4 下孵育6-18小时,使低活性的*尽量渗入组织。
    4.缓慢倒掉*。在37 下将残余的*与组织碎块共同孵育20-30分钟。
    5.向组织碎块加入温热的*培养基,并轻轻地吹吸以分散组织。如果使用无血清培养基。还应加入大豆*抑制剂。
    6 用灭菌的不锈钢网(100-200μm)过滤细胞悬浮液,直至所有组织*散开。计算细胞个数,然后接种细胞进行培养。

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