牛口蹄疫C型（FMD-C）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：
1.2ng/L - 45ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中口蹄疫 C型（FMD-C）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛口蹄疫 C 型（FMD-C）
蹄疫 C 型（FMD-C）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入口蹄
疫 C型（FMD-C），再与  HRP 标记的口蹄疫 C 型（FMD-C）抗体    ，形成抗体-抗原-酶
。用纯化的牛口
标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色，
并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的口蹄疫 C 型（FMD-C）呈正相
关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛口蹄疫     C
型（FMD-C）浓度。
试剂盒组成
标本要
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑制辣根过
（HRP）活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
150μl的原倍标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  5号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  4号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  3号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  2号标准品加入  150μl标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后
37℃温育30分钟。
30倍稀释后备用
配液：将 30倍浓
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静
重复 5次，拍干。
30秒后弃去，如此
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液    50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总：
计算
以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上
，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标

 
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有
析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响
。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值
大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月