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人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒

时间:2014-11-18      阅读:144

人ELISA试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人骨成型蛋白2(BMP-2)水平。用纯化的人骨成型蛋白2(BMP-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入骨成型蛋白2(BMP-2),再与HRP 标记的骨成型蛋白2(BMP-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨成型蛋白2(BMP-2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人骨成型蛋白2(BMP-2)浓度。

人ELISA试剂盒样本处理及要求:

1.血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

 

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