入了ELISA的门 这些技术点你得知道
时间：2014-12-29 阅读：2042
样本加样方法
1、细胞上清：前处理必须是细胞离心去除，每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。
2、脑脊液：前处理必须是细胞离心去除，每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。
3、血清血浆：请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
A.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
B.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
C.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
D.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
E.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
4、组织匀浆液的样本，要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解，造成检测结果的值偏低。
因组织匀浆液的样本蛋白种类多，含量丰富，实验参照血清血浆标本的处理方法进行，否则就会影响实验结果。具体是加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，需稀释时，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
因为目标蛋白不同，可能造成降解的蛋白类型可能不一样，如果实验前通过文献确定用哪种蛋白酶抑制剂，有针对性加入，可节省抑制剂。如果查不到相关文献，可采用组合抑制的办法确保蛋白不易被降解。