48T人白细胞介素-17(IL-17)ELISA试剂盒云南,昆明
时间:2012-05-11 阅读:470
人白细胞介素-17(IL-17)ELISA试剂盒云南,昆明
用 途:
人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒于科研、而非用于临床诊断。
人白细胞介素-17(IL-17)ELISA试剂盒云南,昆明
试验原理:
人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和*标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。
人白细胞介素-17(IL-17)ELISA试剂盒云南,昆明
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-10℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型
塑料膜板盖1块半块即用型
标准品:800pg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀
空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
*标记的抗IL-17抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗涤缓冲液1瓶(60ml)1瓶(30ml)按说明书进行稀释
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
自备材料
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1.此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可*保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
3.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
4.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
800 pg/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400 pg/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 pg/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 pg/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 pg/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 pg/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2.洗涤缓冲液(20×)的稀释:蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育15分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
标准品浓度(pg/ml)
A800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
B400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
C200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
D100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
E5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
F2525样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
结果分析
以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IL-17 标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IL-17 含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1.灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2.特异性:不与人其它细胞因子反应。
3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
N6501-100gNicorandil *[65141-46-0]
CLS005275-4KUCollagenase, purified 胶原酶 >500U/mg/
PT1034-5gPAR 4-(2-吡啶偶氮)*[1141-59-9]
PT1892-500gParaffin 切片石蜡 58-60℃, bp: 3500 C/
P2301-250mlpH Standard Solutions pH标准溶液/
P2019-100gPhthalide 苯酞[87-41-2]
P6165-100g1200万,阴离子聚丙烯酰胺[9003-05-8]
R0278-500gRhodamine B 罗丹明 B[81-88-9]
P6722-1gPyrogallol Red 焦酚红[32638-88-3]
P0724-5gPyronin B 派洛宁B[2150-48-3]
ST3411-25gSafranin O 番红O[477-73-6]
R1509-500mlRed oil 土耳其红油[8002-33-3]
S6736-1gShikimic acid 莽草酸[138-59-0]
S2561-25gSilver chloride 氯化银[7783-90-6]
S2476-B-40片Silica gel plate Type GF 薄层层析硅胶板GF型/
SB0870-5gSnailase 蜗牛酶/