EIA和ELISA的兴起
时间:2011-05-26 阅读:2698
在本期的临床化学(Clinical Chemistry)上,Lequin追述了EIA/ELISA技术的发展,从60年代该技术的提出,到后来该项技术在生物化学分析领域的广泛应用。当我们在Oranon开始我们的计划时,我们并没有想到该技术能奠定将来数以亿计的实验室分析基础。我们开展这个项目的初衷只是由于当时Oranon管理部门热衷于多年前免疫化学诊断妊娠的成功(以血清抑制凝集试验和乳胶凝集试验为基础)。但是由于工程太大,需耗时较多而阻止了该项技术的的深入发展。以一种简易的可以根据颜色变化而即插即读的试纸条作为基础,似乎可以取得进一步的成功。所以,当Schuurs提出将酶附着于抗原或者抗体,通过化学反应的测定终产物颜色这一设想时,大家都表示了赞同。当然,我们采用了分析妊娠HCG来作为我们研究的模型。尽管如此,Schuurs对于这项技术将来的应用仍然非常清楚。正象他在试验建议的zui后一句话所说的那样:我认为,探索这项技术所取得的任何成功,都将开辟免疫学诊断的新领域。
我们早期的研究还是取得了一定的成绩,至少在试验原理上,但是当我们发展以EIA技术为基础的根据颜色变化而诊断妊娠的即插即读的技术时,我们还是失败了,虽然我们竭尽全力。将许多必需的试剂压缩到一个试纸条上,并且在模板上使反应过程标准化,在哪个时间看起来还需要解决很多技术问题。实际上,在Oranon研究组发现了溶胶颗粒免疫测定(SPIA)技术发明后,依靠颜色变化诊断妊娠的问题也就变得可行了。取而代之的,我们转移到了其他应用方面。如内分泌领域(我们的目的是直接想同RIA竞争),感染病领域。zui初是检测乙型肝炎检测,该领域在前些年澳抗被作为乙型肝炎病毒感染的标志物被发现后就进行了一些探索。
同时,我们也注意到了Engvall和Perlmann以及随后的学者开展的关于ELISA和EIA的研究,我们zui感兴趣的应用领域是细菌、寄生虫和病毒,尤其是London的Voller、Bidwell以及荷兰国家公共卫生研究所的Ruitenberg所做的工作。我们也意识到和当时比较笨拙的方法如免疫荧光,血清凝集实验,补体结合实验相比,ELISA和EIA法的简易性使其在广泛的微生物感染诊断中获得了快速的发展。这就迅速为大家所接受,并且促进了众多的生物医学实验室和第三世界的国家建立了一种可靠的感染性疾病诊断方法。当时,这种方法只被局限地应用于少数高度专业的实验室。Voller和Bidwell首先应用了96孔微板用于EIA/ELISA实验,由此也引发了*次免疫分析自动化的浪潮。我们在Oranon也轻易地接受了该方法用于检测乙型肝炎和其他献血筛查项目。
EIA和ELISA在内分泌学和肿瘤学方面的应用较感染性疾病要慢得多,因为在这些领域,RIA法已是捷足先登。EIA和ELISA技术的性和灵敏度都落后于已经较成熟了的RIA法。而且很多实验室都已经配备了放射性核素的相关设备,并且习惯了与之开展工作,他们还不能意识到非同位素检测的优势。是自动化改变了这些,RIA的自动化牵涉到放射性同位素引起的容器和废物处理问题,而EIA和ELISA却使全自动随机存取的免疫分析系统成为可能,该系统正是80年代诊断仪器制造商努力开拓的方向。这就导致了许多低成本的、设备简单,可靠性强的免疫化学诊断方法从专业的放射性实验室进入了普通化学实验室。EIA和ELISA也因此找到了他在诊断感染性疾病以外的应用领域。