木质素试剂盒检测方法
时间:2021-06-24 阅读:193
木质素试剂盒检测方法供应商:合肥莱尔生物科技有限公司
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-B636
规格:50T/48S
产品内容:
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1 支,50mg 木质素,4℃保存。临用前加入 1mL 高氯酸,充分混匀溶解,配成50mg/mL 的标准液。
木质素试剂盒检测方法产品说明:
木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低与木质素含量正相关。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品处理:
样品 80℃烘干至恒重,粉碎,过 40 目筛,称取约 5mg 于 1.5mL EP 管中。二、测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 280nm,冰乙酸调零。
2、操作表:在 1.5mL 玻璃试管依次加入下列试剂:
| 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样品(mg) | 5 | - | - |
试剂一(µL) | 500 | 500 | 500 |
高氯酸(µL) | 20 | - | 20 |
标准液(µL) | - | 20 | - |
封口膜密封,充分混匀。于 80℃水浴锅水浴 40min,进行乙酰化。每隔 10min 震荡一次, 然后自然冷却。 | |||
试剂二(µL) | 500 | 500 | 500 |
充分混匀后于常温 8000g 离心 10min,取上清。 | |||
上清液(µL) | 20 | 20 | 20 |
冰乙酸(µL) | 980 | 980 | 980 |
测定 280nm 下的吸光值 A,记为 A 测定管、A 空白管、A 标准管,计算△A=A 测定管-A 空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。 |
木质素试剂盒检测方法三、木质素含量计算:
C 标准=C 原液×V 标准÷V 乙酰化×V 上清÷V 检测=0.0196 mg/mL
木质素(mg/g)= △A÷(△A 标准÷C 标准)×V 检测÷(W×V 上清÷V 乙酰化)
= 0.9996×△A÷△A 标准÷W
C 标准:标准液在最终检测体系中的浓度,0.0196 mg/mL;C 原液:标准液浓度,50mg/mL;V 标准:加入的标准液的体积,0.02mL;V 乙酰化:乙酰化反应体积,1.02mL;V 上清:上清液体积, 0.02mL;V 检测:检测反应总体积,1mL; W:样本质量,g。
木质素试剂盒检测方法注意事项:
1、试剂一有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
2、加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。
3、冰乙酸具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱内操作。
4、取上清加冰乙酸步骤根据自己样品乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在 0.1-0.8 之间即可,并在公式中参与计算。