苦参碱诱导胃细胞自噬和凋亡测试报价低

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苦参碱诱导胃细胞自噬和凋亡测试报价低相关文献：

苦参碱是从传统中药苦参中提取的一种生物碱,具有的药理作用。本实验的目的是研究苦参碱对胃SGC-7901细胞的作用,阐明自噬和凋亡在苦参碱胃过程中的作用,并进一步证明苦参碱诱导细胞自噬发生的信号转导通路,为中药单体及联合用药胃提供实验依据。 方法 用SRB法检测细胞活力,流式细胞术检测苦参碱对细胞周期的影响。Annexin-V-FITC/PI双染检测不同浓度苦参碱对细胞凋亡的诱导作用。用倒置相差显微镜观察苦参碱干预后SGC-7901细胞的形态学改变,并用透射电镜进一步观察细胞的微结构变化。同时用MDC染色后通过荧光显微镜鉴定自噬的发生。应用western blot检测自噬分子标记物LC3表达水平,从分子生物学水平检测细胞自噬水平的改变。用自噬剂、自噬诱导剂、凋亡剂分别联合苦参碱干预胃细胞,调控苦参碱诱导的自噬和凋亡,用’PI染色检测其对苦参碱诱导的胃细胞死亡率的影响,后用western blot检测PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路的相关分子是否参与苦参碱诱导的自噬过程,并用实时定量RT-PCR检测促凋亡基因Bax和自噬相关基因Beclin1的mRNA表达水平。 结果 苦参碱能SGC-7901,呈时间剂量依赖性,并将SGC-7901细胞阻滞在细胞周期的G0/G1期。Annexin-V-FITC/PI双染结果显示苦参碱以剂量依赖性诱导细胞凋亡,与对照组相比,当用0.5、1.0和2.0mg/ml的苦参碱处理SGC-7901细胞后,凋亡率分别上升72.92±3.41%、77.75±2.19%和83.28±2.75%。倒置相差显微镜观察到苦参碱干预后的细胞形态学改变,在细胞质中可见大量的大小不等的空泡,而且随着苦参碱浓度的增加胞质中的空泡逐渐增大增多。透射电镜进一步苦参碱干预后的SGC-7901细胞内有大量自噬泡形成。MDC染色荧光显微镜检测可见苦参碱组比未处理组显示更强的荧光信号和更多的MDC标记颗粒(?)Western blot结果显示苦参碱诱导胃细胞LC3-Ⅱ表达水平以时间和剂量依赖性增加,并且为苦参碱细胞自噬活性而非自噬体降解所导致的LC3-Ⅱ。PI染色流式细胞仪检测显示细胞死亡率随着苦参碱浓度的增加而,用自噬剂3-MA或巴弗洛霉素A1联合干预后,苦参碱诱导的细胞死亡率进一步增加,并且在透射电镜下可见到部分苦参碱干预细胞出现的凋亡形态学改变并且细胞内自噬泡减少,Annexin-V-FITC/PI双染结果进一步自噬能增加苦参碱诱导的凋亡,并且自噬剂能增加苦参碱对胃的作用。用caspase剂或自噬诱导剂联合干预降低了苦参碱诱导的细胞死亡率。Western blot检测结果显示苦参碱干预后,尽管总Akt和总mTOR表达水平轻度降低,但Akt (Ser473)磷酸化水平以时间和剂量依赖性,其下游效应分子mTOR (Ser2448)和p70S6K (Thr389)的磷酸化水平也轻度。实时定量RT-PCR显示苦参碱上调促凋亡基因Bax和自噬基因Beclin1的mRNA表达水平。 结论 苦参碱对胃具有的抗活性,而且苦参碱诱导胃细胞死亡时凋亡和自噬均被。自噬是胃细胞的适应性反应,了细胞存活,自噬能够苦参碱诱导的细胞凋亡,因此联合自噬剂是进一步苦参碱抗作用的策略。另外,PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路可能未参与苦参碱诱导的自噬过程。

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