怎样用荧光染料标记蛋白？FITC标记的操作步骤

荧光染料蛋白体外标记

荧光染料标记蛋白或多肽是常见的蛋白体外标记，除了GFP等融合表达荧光蛋白之外，目标蛋白经过荧光染料标记可以直接进行活体示踪、细胞分选等下游实验操作。

原理：荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。蛋白荧光标记利用荧光物质共价结合在目标分子的某个基团上，利用它的荧光性质来提供被研究对象的信息。

应用和特点：活化的荧光染料，例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）、罗丹明B（Rhodamine B）或Alexa Fluor染料等，可用于标记抗体或蛋白功能基团，生成分子探针并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记性抗体或其他纯化的生物分子时，它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针，应用于细胞成像、流式细胞术、印迹和酶联吸附实验（ELISA）。因为荧光标记物具有无放射物污染、操作简便等特点，使其在蛋白功能研究、科研筛选等许多研究领域的应用日趋。

荧光标记的蛋白、种类：

牛血清白蛋白BSA   

人血清白蛋白HAS  

转铁蛋白Transferrin

血蓝蛋白(KLH)

刀豆球蛋白Concanavalin A

过氧化氢酶Catalase  

络蛋白Casein

卵清蛋白、乳清蛋白Ovalbumin

组蛋白histone

胶原蛋白Collagen

链霉亲和素Streptavidin from Streptomyces avidinii

氯化血红素;血晶素Hemin

牛球蛋白

转铁蛋白Transferrins

粘蛋白Mucin

FN纤粘连蛋白Fibronectin

乳铁蛋白Lactoferrin

玉米蛋白Zein, from Corn

鱼精蛋白Protamine Sulfate from Salmon sperm

肌红蛋白(肌球蛋白)Myoglobin

马脾铁蛋白HSF

肌动蛋白Actin

甲状腺球蛋白Thyroglobulin

肝素Heparin

胰岛素Insulin

文献定制产品：

FITC标记的转铁蛋白(Tf-FITC)

FITC标记重组灵芝调节蛋白

FITC标记的GSTP1蛋白

FITC标记链霉亲和素

FITC标记蛋白

FITC标记卵清蛋白OVA

FITC标记牛血清白蛋白BSA

FITC标记鬼笔环肽

FITC标记I型胶原

荧光素FITC标记牛血清白蛋白FITC-BSA/BSA-FITC的实验操作步骤Albumin-Bovine-Serum-FITC的合成方法及使用材料
【产品材料】
1、异硫氰酸荧光素（FluoresceinIsothiocyanate，FITC）异构体I（IsomerI），M.W：389.4发射光谱（吸收光谱）493nm，荧光光谱550nm
2、牛血清白蛋白（BSA），M.W：68000，纯度98%。（AlbuminBovineSerum）
3、标记缓冲液：0.5MpH9.5C.B，洗脱液：0.01MpH7.2PBS
 
【标记方法】 直接标记法，RT2.5~3.0hs，离心后过SephadexG-50，0.01MpH7.2PBS洗柱，洗脱液为0.01MpH7.2PBS。
 
【质量分析】 溶液为0.01MpH7.2PBS，蛋白浓度为5.12mg/ml左右，FITC浓度为30~45ug/ml，含有2~5/万NaN3防腐，每支0.5ML。
 
【保存温度】-20℃冻存二年以上。
 
【应用范围】
1、用于、、梅螺旋体、钩端螺旋体等微生物的抗原或抗体检查。
2、自身病的多种自身抗体荧光检查，如抗核抗体，抗心肌抗体等。
3、细胞因子等检查的荧光流式细胞仪测定。
4、白细胞分型抗原的荧光染色。
5、及病理中抗原，抗体检查，如抗原检查。