猪Elisa试剂盒操作步骤详细介绍

  猪Elisa试剂盒系由预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪瘟病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪瘟病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后，产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪瘟病毒抗体。

  猪Elisa试剂盒操作步骤：

  1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

  2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

  3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

  4.混匀，置37℃反应30分钟。

　 5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

  6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

  7.猪Elisa试剂盒洗涤，同步骤5。

  8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

　 9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

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