人转录因子E2F1试剂盒激活方法与检测程序方法

　　人转录因子E2F1试剂盒激活方法：

　　1. 将450ul 标本稀释液加入到一支 1.5ml 进口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血浆标本。

　　2. 加20ul 1 N HC I ,盖紧，上下混匀。 2 - 8 ℃ 放置60± 2 分钟。

　　3. 加20ul 1 N NaOH, 盖紧，上下混匀。

　　4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。计算结果时乘 以稀释倍数 50 。 ( 注意：不同的标本E2F1 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度)

　　5. 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释 (410ul 的标本稀释液+ 50ul 样本+ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。

　　检测程序

　　1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品(已激活) 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

　　2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。

　　8. 每孔加入100ul 终止液混匀。

　　9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

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