ELISA试剂盒代测样本需要注意哪些问题?
时间:2023-08-31 阅读:268
ELISA试剂盒代测样本需要注意哪些问题?
1.血清样本制备:
将收集于分离管的全血样本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000x g 离心20min, 收集上清。这是一个让血液自然凝固的过程,温度越低,凝集越缓慢,可根据需要添加促凝剂。
2.血浆样本制备:
血浆样本需要抗凝,一般建议用2%EDTA,1%肝素,8%柠檬酸钠作为抗凝剂采集样本,并将样本在采集后的30分钟内于2-8℃,1000x g 离心15分钟,收集上清。根据待测目标物的性质不同选取不同的抗凝剂。组织样本制备:由于溶血会影响检测,需用预冷PBS缓冲液(0.01M, pH=7.4)冲洗3组织,清除残留血液。称量后将组织切碎,在预冷PBS中匀浆(体积取决于组织的重量),正常情况下,9mL PBS适用于1克组织片,建议PBS中添加一些蛋白酶抑制剂,用匀浆器将标本匀浆充分。为了进一步破坏细胞,可以用超声破碎仪对悬浮液进行超声处理,或者对其进行冻融循环。匀浆以2-8℃,5000×g离心5分钟,收集上清。
3.细胞培养液:
样本在采集后于2-8℃,1000x g 离心20分钟,收集上清。
4.细胞裂解液:
推荐使用RIPA 裂解液裂解细胞,裂解完成后2-8℃,1000x g 离心20分钟,收集上清。
5.样本储存:
不要反复冻融,样本处理后可分装密封保存,4℃保存应小于1周,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月。
6.样本管标记:
在样本管盖或管壁标记样本名称及体积,管口以封口膜封好,防止污染。
7.样本体积要求:
按照每个检测孔至少需要100μl体积来准备
8.样本邮寄要求:
干冰或冰袋运输。
9.血清和血浆要求是离心处理后的澄清样本,用不同袋子装好并在袋子表面标注血清或血浆样本及样本数量,如果样本很多,最好放在样本管架上摆放整齐再邮寄。组织和细胞样本可以冻存后邮寄给我们处理样本。
10.必须含有一份书面说明文件,内容包括每个样本管标记名称及体积,每个指标检测样本名称,样本是否做复孔。ELISA试剂盒待测样本需要注意哪些问题?
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