ELISA竞争法和间接法的优势和用途

　　ELISA大致分为五种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法、捕获包被法。在ELISA试剂盒中用得比较多的是双抗体夹心法、竞争法和间接法。那么我先和你们讲一讲竞争法吧。

　　一、间接法ELISA

　　原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。

　　优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度;灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗;不直标一抗，可保留更多的免疫反应性;成本更低，使用标记抗体更少。

　　缺点：交叉反应几率升高。

　　二、竞争法ELISA

　　原理：竞争法ELISA更为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。

　　竞争法(Competitive ELISA)是用样本中的游离抗体/抗原与固相的酶标抗体/抗原竞争性结合的分析方法。当游离抗体(或抗原)浓度越高，则能与固定抗原(或抗体)结合的酶标抗体(或抗原)就越少，后续显色就越浅，即与对照相比，显色越浅，表示检测样本中抗体(或抗原)含量越高。该法特别适合小分子物质的检测也可用于检测比较不纯的样本，且重复性好，但是检测的灵敏度和专一性较差。竞争法测抗原常用于检测小分子抗原及半抗原，这类抗原通常缺乏两个以上的识别位点，不适用于双抗夹心法进行测定。该方法在商业化ELISA试剂盒中被广泛运用。

　　接下来我再说一下间接法，间接法(Indirect ELISA)只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。间接法使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。

　　标签：ELISA 试剂盒 抗原 抗体 酶标二抗  酶标抗体 古朵生物

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