古朵生物:ELISA试剂盒竞争法操作小技巧
时间:2023-08-16 阅读:214
古朵生物:ELISA试剂盒竞争法操作小技巧
竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成反比。古朵生物技术详解操作步骤如下:
(1)将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。
(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达zui充分的量。洗涤。
(3)加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原zui多,故颜色zui深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。
Elisa间接法、竞争法、捕获法,应用亲和素和ELISA
亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物s分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素。生物s又称维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,生物s-羟 基琥珀亚胺酯(BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物s化的产物。亲和素与生物s的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物s分子的结合位置,可以连接更多的生物s化的分子,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物s与ELISA偶联起来,就可大大提高ELISA的敏感度。
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