实验步骤:BCA法-总蛋白操作原理步骤
时间:2023-08-02 阅读:530
BCA法-总蛋白操作原理步骤
操作原理:
原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性.检测浓度下限达到25微克1毫升,最小检测蛋白量达到0.5微克,待测样品体积为120微升。
BCA法-总蛋白以下操作步骤
一.标准曲线的绘制:各管 按照下表加入试剂孔号01234567蛋白标准溶液( μL) 05 10 2040 6080 100去离子水( uL) 100 95 90 80 604020 0对应蛋白含量( μg) 02.55.10.0 20.0 30.0 40.0 50.0
二.根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B ( 50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀:
三.各管充分混匀,37C放置 30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量( μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线:
四.稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为100 ul,加入bca工作液1000μL,充分混匀,37C放置 30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值
BCA法-总蛋白先按说明书清点试剂盒里的试剂和物品,然后进行标曲稀释和BCA工作液的配制,之后以血清样本为例,进行实验。整个过程包括标曲稀释,试剂准备,样本准备,实验操作,仪器检测以及数据处理。
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