古朵生物:ELISA试剂盒实验步骤及注意事项
时间:2023-07-28 阅读:309
古朵生物:ELISA试剂盒实验步骤及注意事项
ELISA(酶联免疫吸附实验)试剂盒是一种用于测量蛋白质、抗体或其他分子浓度的常用检测工具。它通常由塑料微孔板和预涂有特定抗体或蛋白质的试剂盒组成,可以方便、快速、准确地检测样品中目标物质的存在以及其浓度大小。
Elisa试剂盒检测步骤:
包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至适浓度(1~10 ug /ml),每凹孔加0.3 ml,4℃过夜,或37℃水浴3小时,贮存冰箱。
洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
稀释:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至适浓度(1~10 ug /ml),每凹孔加0.3 ml,4℃过夜,或37℃水浴3小时,贮存冰箱。
洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
标记:加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液,37℃作用1~2小时或由预试实验确定作用时间。
洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
包被抗体:加入0.2ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT),室温作用30分钟(另作一空白对照,0.4 ml底物加0.1 ml终止剂)。
加终止剂:每凹孔加2M H2SO4或2 M柠檬酸0.05 ml。
观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(OPD用492nm)OD值。
Elisa试剂盒检测事项:
ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种常见的生物化学检测方法,用于检测血清、尿液、唾液等样本中的特定分子。以下是进行ELISA实验时需要注意的事项:
1.操作时要严格遵守实验室安全规定和个人防护措施。
2.在进行试剂盒操作前,应按照说明书要求混合或管内搅拌试剂。
3.所有试剂和样品均应在4°C下储存,并在使用前充分恢复到室温。
4.对检测样品要采用适当的稀释倍数,以防止过高浓度影响结果准确性。
5.在加样时,要避免空气泡的产生。同时,要记录好每个微板孔洞的加样时间、加样量等信息。
6.在孵育期间应保持恒定的温度和湿度,以及适当的震荡(如轻微振动),以促进反应发生。
7.洗涤步骤必须严格按照说明书要求执行,并且每个孔洞必须充分冲洗,
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