免疫组化大家基本上都做过，你知道有二抗，也应该知道免疫组化的原理就是一抗结合到目标蛋白，再有二抗来进行信号放大，大概是这样：

　　但是你知道二抗的信号放大实际上有多种方法……这就需要你进行二抗标记方法的选择，二抗标记方法是直接法：

　　就是直接在二抗上标记酶，比如HRP，来进行显色，这样的二抗实际上很便宜，但是缺点就是灵敏度低，好多低丰度的蛋白，结合不上，免疫组化染出来的效果就不太好。

　　第二种方法，叫做PAP，比如二抗标记了HRP，他们就在孵育二抗后，再孵育一种能结合HRP的一抗，就像这样：

　　这种方法灵敏度是上去了，但是非特异性增高了，于是被主流淘汰了。

　　第三种方法被称为ABC法或者SABC法，主要是在二抗上标记生物su，孵育二抗后，加入亲和素以及标记了HRP的生物su，以这样的聚合方式，来进行信号的放大作用：

　　这种方法的优点是能够成倍提高灵敏度，但同时也会提高非特异性，于是就产生了第四种方法，LSAB法标记的二抗：

　　这种方法，直接在亲和素上加上HRP标记，灵敏度也很高，同时降低了SABC法的非特异性。而且，LSAB法在实验的时一般孵育时间短(通常就10分钟)。

　　但SABC法和LSAB法在实验过程中会需要进行内源生物su封闭，会麻烦一些。为了省去麻烦，就产生了第五种标记方法，也就是Polymer法，就是在二抗上标记聚合的HRP：

　　这样二抗的信号就得到了放大，灵敏度也提高了，但Polymer法、SABC法、LSAB法，都不能用于定量实验，只能用在IHC上。

　　那免疫荧光呢?免疫荧光主流是采用直接法、LSAB法，以及直接标记或者LSAB标记的三抗来进行信号放大的。总结一下，就是直接法的二抗便宜但是灵敏度差;PAP法基本已经淘汰，LSAB和SABC法的灵敏度高，但是贵，步骤多;Polymer法灵敏度高，步骤简单，但是贵。

　　二抗 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。上海古朵生物公司中“古朵”取自good的音译，寓意是质量好，品牌好，服务好!欢迎新老客户洽谈!