腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-293操作步骤
时间:2019-11-06 阅读:114
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114次那年的十一月,那段的十一月,已经整整一年了,我清晰的记得那年的寒冷是不能用今年的寒冷来形容,冰冷的风不带一点间隙的从四面八方汹涌而来,天空总是阴沉沉的,每天都在下着细雨,寒冷又叫人绝望。接下来介绍 腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-293操作步骤
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量*,使*的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去*,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止*作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。