PEI实验使用注意事项

质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA 浓度，260nm / 280nm比值确定 DNA 纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。

特别提醒

1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70～80%。

2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。

4. PEI对大多数细胞来而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA使用 1～4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。