艾美捷Epigentek染色质可及性检测试剂盒原则与程序
时间:2022-06-09 阅读:112
艾美捷Epigentek EpiQuik™ 染色质可及性检测试剂盒是一套完整的优化试剂,旨在通过实时 PCR 对各种生物样品的核小体/转录因子定位进行染色质可及性的基因特异性分析。它是快速检测开放和封闭染色质的一种经济有效且有用的工具。
艾美捷Epigentek EpiQuik™ 染色质可及性检测试剂盒特点:
1、J其快速和方便的方案,使整个过程(从细胞组织样本到用于 PCR 的即用 DNA)在短短 1 小时 30 分钟内完成。
2、能够用于培养的细胞以及新鲜和冷冻的组织。
3、快速过程可最大限度地减少核损伤和分离染色质成分的损失,保留染色质结构。
4、试剂盒中包含人用内部对照引物作为参考,用于分析样本 DNA 中特定基因靶标的染色质可及性程度,以及验证是否实现了适当的酶消化。
5、可以选择单反应测定或高通量多反应测定,使测定灵活。
背景资料:
染色质中调控元件的可及性对于基因调控的许多方面都至关重要。位于调节元件上的核小体抑制转录因子接近 DNA。为了阐明染色质和转录因子之间相互作用的作用,通过绘制核小体沿基因组的定位来确定染色质的可及性至关重要。一般来说,染色质越浓缩,转录因子和其他 DNA 结合蛋白就越难接近 DNA 并执行它们的任务。DNA 越容易接近,周围的基因就越有可能被主动转录。核小体的存在(或不存在)直接或间接影响多种其他细胞和代谢过程,例如重组、复制、着丝粒形成和 DNA 修复。
艾美捷Epigentek EpiQuik™ 染色质可及性检测试剂盒原则与程序:
EpiQuik™ 染色质可及性检测试剂盒包含通过实时 PCR 对细胞/组织样本的染色质可及性进行基因特异性分析所需的所有必要试剂。该试剂盒包括用于确定染色质消化是否成功的内部对照引物。在该测定中,染色质从细胞/组织中分离出来,并用核酸酶混合物进行处理。然后使用实时 PCR 分离和扩增 DNA,以对染色质可及性进行区域特异性分析。染色质状态可以根据 DNA 对核酸酶的可及性来识别。外部蛋白质(包括外源性核酸酶)无法接近异染色质中的 DNA,使其受到核小体或 DNA/蛋白质复合物的保护,并可用于随后的 PCR,消化和未消化样品之间的 Ct 变化微不足道。相比之下,常染色质中的 DNA(核小体消耗)可被外源核酸酶访问,使其易受核酸酶消化,并且由于消化和未消化样品之间的大 Ct 偏移而无法用于 PCR。
起始材料和输入量:
起始材料可以包括各种哺乳动物组织或细胞样品,例如来自烧瓶或微孔板培养细胞的细胞、新鲜和冷冻组织等。每个反应的细胞/组织量可以来自 1 x 10 5 个 细胞或2 mg 组织至 2 x 10 6 个 细胞或 40 mg 组织。为获得最佳反应,输入染色质量应约为 0.5 x 10 6 个 细胞或 10 mg 组织。
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