CIK细胞实验方法，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。

由于该细胞同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞（自然杀伤细胞）样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放*后患者*，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞*的*方案。

CIK细胞可以通过多机制抗肿瘤、抗病毒：

1.CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞，通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐，释放穿孔素、颗粒酶，实现对肿瘤细胞的裂解；

2.CIK细胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多种炎性细胞因子，对肿瘤也有直接抑制作用；

3.CIK细胞可以通过配体-受体（Fas:FasL）介导的方式诱导肿瘤细胞凋亡，因此CIK尤其适用于FasL阳性肿瘤的治疗；

4.CIK细胞分泌的细胞因子能显著刺激初始型T细胞增殖，有效激活机体的免疫系统，使之趋于正常，提高病人自身抗肿瘤的能力。

目前，肿瘤的发生机制尚未形成普遍接受的理论。研究者普遍认可肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关。即在正常情况下，肿瘤与机体的防御机能之间处于一种动态的平衡，而一旦这种平衡被破坏，就可能发生肿瘤。身体各组织细胞受到外界化学、物理、生物等因素刺激或自身细胞衰老变异等因素的影响，使得体内某些细胞发生突变，成为癌前细胞；而机体免疫功能低下或者由于免疫异常，无法及时识别、杀伤、清除这些异常细胞，突变细胞在组织内复制生长，达到一定数量后破坏器官功能，肿瘤即发生。肿瘤患者，尤其是恶性肿瘤病人往往免疫功能、特别是细胞免疫功能低下，因而疾病呈进展、活动、预后差。因此，提高机体免疫力，建立有效的免疫应答是治疗肿瘤zui有希望的途径。CIK细胞治疗即将大量杀伤性高、功能强、数量多的免疫活性细胞回输患者体内，直接发挥杀死肿瘤细胞的作用，并通过调节、激活患者的免疫体系，调动、提高患者自身的抗肿瘤能力。

CIK细胞具有以下突出的特点：

1.增殖速度快，杀瘤活性高。CIK细胞可以在体外大量扩增，培养14天可以增殖200倍以上，其效应细胞CD3+CD56+的增殖可达1000倍以上，抗肿瘤活性得以大大增强。

2.杀瘤谱广。CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤是非MHC限制的，对多种肿瘤细胞均有杀灭作用。

3.能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响；反之，CIK细胞可以诱导FasL阳性肿瘤细胞的凋亡。

4.对多重耐药肿瘤细胞同样敏感。CIK细胞对放、*敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性。

5.CIK细胞杀瘤活性不受CsA（*A）和FK506（普乐可复）等免疫抑制剂的影响。

6.对正常骨髓造血前体细胞毒性小，仅对红系生成产生轻微的抑制，这可能与CIK细胞自身分泌高水平的IFN-γ有关。

7.CIK细胞具有识别肿瘤的机制，特异性强，对正常的细胞无毒性作用。

8.安全性好。CIK细胞是活化的患者自体细胞，应用安全，不会产生排斥等反应，患者副反应小。

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
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6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

间隙连结蛋白31.9抗体 GJC1
甘油激酶2抗体 GK2
β-半乳糖苷酶1/β-Gal/弹性蛋白受体1抗体 GLB1
*脱羧酶P蛋白抗体 GLDC
核孔蛋白GLE1抗体 GLE1
肾小球上皮蛋白1抗体 GLEPP1
转录因子Gli4/锌指蛋白gli4抗体 GLI4
麦角蛋白抗体 Gliadin
胶质瘤发病相关蛋白1抗体 GLIPR1L1
糖基转移酶25结构域1/前胶原半乳糖基转移酶1抗体 GLT25D1
*酰胺水解酶抗体 GLS2
糖基转移酶25结构域2/前胶原半乳糖基转移酶2抗体 GLT25D2
糖基转移酶28家族1抗体 GLT28D1
糖基转移酶6结构1抗体 GLT6D1
胶质瘤抑癌候选基因2抗体 GLTSCR2
磷酸化糖皮质激素受体抗体 Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226)
葡萄糖转运蛋白6抗体 GLUT6
糖皮质激素受体β抗体 Glucocorticoid Receptor beta
胰岛葡萄糖6磷酸酶2抗体 Glucose 6 phosphatase 2
葡萄糖氧化酶抗体 Glucose Oxidase
葡萄糖苷酶2β/Glucosidase IIβ抗体 Glucosidase 2 subunit beta
*脱氢酶2抗体 GLUD2
磷酸化*受体1抗体 phospho-GluR1 (Thr840)
γ-谷氨酰水解酶抗体 GGH
谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶抗体 Glutamyl Prolyl tRNA synthetase/ProRS
谷氧还蛋白2抗体 Glutaredoxin 2
谷氧还蛋白5抗体 Glutaredoxin 5
*过氧化酶2抗体 GPX2
*过氧化酶7抗体 GPX7
*S转移酶α1抗体 GSTA1
*S转移酶κ抗体 GSTK1

化受体结合**激酶2抗体IgG 大麦叶片原生质细胞分离试剂盒  0.2ml
Ai-Shrimp tropomyosin /FITC  荧光素标记南美白对虾过敏原蛋白（虾原肌球蛋白）抗体IgG 烟草叶片原生质细胞分离试剂盒  0.2ml
Ai-SIP1 /FITC  荧光素标记运动神经元存活蛋白结合蛋白1抗体IgG 植物质粒菌化试剂盒  0.2ml
Ai-SIRT1/FITC  荧光素标记沉默调节蛋白1抗体IgG 纯化叶绿体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser47) /FITC  荧光素标记磷酸化沉默调节蛋白1抗体IgG 植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC  荧光素标记磷酸化沉默调节蛋白1抗体IgG 高多糖多酚植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-Skp2/FITC  荧光素标记细胞S相激酶相关蛋白抗体IgG 高多糖多酚植物组织叶绿体DNA高纯分离试剂盒  0.2ml
Ai-SLC4A4/FITC  荧光素标记*协同转运蛋白4-A4抗体IgG 植物细胞叶绿体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-Slc4a7/Nbcn1 /FITC  荧光素标记*协同转运蛋白4-A7抗体IgG 大量植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-SLC6A19 /FITC  荧光素标记钾依赖钠钙交换蛋白6IgG 通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-SLC16A3/MCT-4/FITC  荧光素标记MCT4抗体IgG 高多糖/酚植物线粒体DNA萃取试剂盒  0.2ml
Ai-Slc22A17/FITC  荧光素标记可溶性载质转运蛋白22A17抗体IgG 植物基因组DNA纯化试剂盒（低多糖/酚）  0.2ml
Ai-SLC24A5/FITC  荧光素标记可溶性载质转运蛋白SLC24A5抗体IgG 植物基因组DNA纯化试剂盒（高多糖/酚）  0.2ml
Ai-SLC33A1/FITC  荧光素标记乙酰*转运蛋白1抗体IgG 果菜类食物DNA分离试剂盒  0.2ml
Ai-SLC34A2/NaPi-2b/FITC  荧光素标记磷酸钠协同转运蛋白抗体IgG 稻麦类食物DNA分离试剂盒  0.2ml
Ai-Slc26a5/Prestin/FITC  荧光素标记外毛细胞运动