细胞名称:UMNSAH/DF-1（鸡胚成纤维细胞）实验方法

细胞形态

成纤维细胞样

背景描述

UMNSAH/DF-1细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养，传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明UMNSAH/DF-1细胞是永生化而没有转化。UMNSAH/DF-1细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒的基质。

生长培养基

DMEM高糖(货号:PM150210)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：39℃（Max.40℃，Min.38℃）

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
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6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

糖原合酶激酶-3β抗体 GSK-3 beta (NT)
三磷酸鸟苷环水解酶抗体 GTP cyclohydrolase 1
促代谢型*受体5抗体 mGluR5
生长调节致癌基因-1抗体GROa GRO Alpha
G蛋白偶合受体激酶1抗体 GRK1
促胃泌素释放肽抗体 Gastrin Releasing Peptide
磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗体 phospho-GPS1(Ser474)
脑糖原磷酸化酶抗体 GPBB
G氨基丁酸受体3抗体 GABR B3
G氨基丁酸受体α3抗体 GABA A Receptor alpha 3
GEN1蛋白抗体 GEN1
*磷酸核糖基焦磷酸酰胺基转移酶 Glutamine PRPP amidotransferase
α-半乳糖苷酶抗体 Galactosidase alpha
蛋白偶联受体55抗体 GPR55
生长抑制DNA损伤基因45γ抗体 GADD45γ GADD45 gamma
生长停滞特异性蛋白2家族3抗体 GAS2L3
颗粒酶K抗体 Granzyme K
甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5抗体 GDPD5
γ谷氨酰转移酶抗体 GGT1
G1氨基丁酸A型受体α1抗体 GABA A Receptor alpha 1
*脱羧酶-65抗体 GAD65
*脱羧酶-65抗体(C端） GAD65
半乳糖凝集素3抗体 Galectin 3
神经生长相关蛋白43 GAP43
3-磷酸甘油醛脱氢酶（兔来源免疫组化用抗体） GAPDH
3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体) GAPDH(3E12)-Loading Control
生长停滞特异性蛋白2家族1抗体 GAS2L1
G蛋白偶联受体97抗体 GPR97
G蛋白结合蛋白7抗体 GBP7
绿色荧光蛋白抗体 GFP
绿色荧光蛋白抗体 GFP

性比色法定量检测试剂盒  0.2ml
ai-SPA-1/SIPA-1  荧光素标记抗信号感应增殖相关蛋白 1抗体IgG 植物果胶甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性荧光定量检测试剂盒  0.2ml
Ai-SPAG5/map126 /FITC  荧光素标记抗相关抗原5抗体IgG 酵母果胶甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性荧光定量检测试剂盒  0.2ml
Ai-SPARC/FITC  荧光素标记富含半*的酸性分泌蛋白抗体IgG 细菌果胶甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性荧光定量检测试剂盒  0.2ml
Ai-SP-B/FITC  荧光素标记肺表面活性蛋白B抗体IgG 植物总吲哚-3-乙酸（IAA）荧光定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SP-D/FITC  荧光素标记肺表面活性蛋白D抗体IgG 植物游离吲哚-3-乙酸（IAA）荧光定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-Spectrin- Alpha/FITC  荧光素标记血影蛋白/收缩蛋白抗体IgG 植物结合吲哚-3-乙酸（IAA）荧光定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPHK1/FITC  荧光素标记鞘氨醇激酶1抗体IgG 植物弥散吲哚-3-乙酸（IAA）荧光定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPHK2/FITC  荧光素标记鞘氨醇激酶2抗体IgG 植物总吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-Spindlin 1/SPIN-2/FITC  荧光素标记Spindlin 1/SPIN-2 肿瘤形成相关基因抗体IgG 植物游离吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPY /FITC  荧光素标记抗spindly抗体IgG 植物结合吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SRC /FITC  荧光素标记整合素样金属蛋白酶与*1型-7抗体IgG 植物弥散吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量检测试剂盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-phospho-Src (Tyr418)/FITC   荧光素标记磷酸化Src原癌基因抗体IgG Murashige & Skoog基础培养基  0.2ml
Ai-SREBP-1/FITC  荧光素标记*调节元件结合蛋白1抗体IgG Murashige & Skoog*培养基