【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：兔椎间盘纤维环细胞操作步骤

2.组织来源：椎间盘组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔椎间盘纤维环细胞分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。

本公司的兔椎间盘纤维环细胞采用胶原酶-*联合消化法并结合软骨细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Ⅰ型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM-F12、FBS、软骨细胞生长添加剂、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)
罗丹明标记的羊抗小鼠IgG MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)
罗丹明标记的羊抗兔IgG MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)
FITC标记的驴抗羊IgG GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1)
FITC标记的小鼠抗羊IgG Ang- II (Angiotensin II )
辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG GLUT2(Glucose transporter type 2)
辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG ANP(atrial natriuretic peptide)
Alexa Fluor 555标记的兔抗羊IgM GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4)
PE-Cy5.5标记的兔抗羊IgM GHRF (GHRH)
PE-Cy7标记的兔抗羊IgM ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1)
PE-Cy7标记的驴抗豚鼠IgG GLUT4(Glucose transporter type 4)
PE-Cy5.5标记的兔抗豚鼠IgM GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)
PE-Cy7标记的兔抗豚鼠IgM ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2)
PE-Cy3标记的兔抗羊IgM GLP-2(Glucagon-like peptide-2)
PE-CY5标记的兔抗羊IgM GRP94 (gp96)
辣根过氧化物酶标记的驴抗羊IgG Annexin A
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗羊IgG G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein)
罗丹明标记的羊抗大鼠IgG GR (Glucocorticoid receptor)
Cy7标记的驴抗豚鼠IgG Annexin II
PE标记的驴抗豚鼠IgG CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )
PE-Cy3标记的驴抗豚鼠IgG GTP-CH-1
Cy5标记的驴抗豚鼠IgG H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2)
antibody) ELISA Kit  人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素诱导蛋白PS2   48T
BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit  人细菌病   48T
HSV I Ab(Human Herpes simplexvirus I antibody) ELISA Kit  人单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素诱导蛋白PS2   48T
HPV-IgM(Human papillomavirus IgM) ELISA Kit  人状瘤病毒抗体IgM   48T
HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit  人状瘤病毒抗体IgG   48T
HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2) ELISA Kit  人单纯疱疹病毒抗原2   48T
fPSA(Human Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit  人游离前列腺特异性抗原   48T
PSA(Human prostate specific antigen) ELISA Kit  人前列腺特异性抗原   48T
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit  人磷脂酰*   48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit  人*磷酸甘油酯   48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit  人总胆汁酸   48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit  人载脂蛋白C3   48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit  人血清总*   48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit  人金属硫蛋白2   48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit  人可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1   48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit  人3-硝基*   48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit  人糖胺聚糖   48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit  人半胱氨酰白三烯   48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit  人钙腔蛋白   48T