【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：兔脂肪间充质干细胞操作步骤

2.组织来源：脂肪组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔脂肪间充质干细胞分离自脂肪组织；脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶；贮存的脂肪，在需要时可迅速分解成甘油和脂肪酸，液输送到各组织以供利用。它们影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应，参与多种重要病理生理过程；脂肪组织已由过去单纯作为能量储存的器官而成为一个极其重要的内分泌系统。脂肪组织中也存在一些干细胞群，具有自我更新能力和多向分化潜能，被称为脂肪组织来源的间充质干细胞，简称脂肪间充质干细胞。与骨髓间充质干细胞相比，在来源、细胞群特点以及分化潜能等多方面极为相似。但是，脂肪间充质干细胞更易获得足够数量的细胞，且获取过程中对机体损伤更小，是更为理想的自体干细胞源。脂肪组织分离得到脂肪间充质干细胞以梭形为主要形态，BrdU可标记其细胞核。

本公司的兔脂肪间充质干细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经CD90/CD44、CD34/CD45免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM-F12、FBS、间充质干细胞生长添加剂、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。

Alexa Fluor 555标记的兔抗小鼠IgM ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)
碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗小鼠IgM Kir6.2 peptide
碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗小鼠IgM AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)
辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG Aurora B
胶体金标记的兔抗猪IgG Nociceptin
PE标记的兔抗猪IgG B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1)
PE-CY5标记的兔抗猪IgG Nociceptin receptor
PE-Cy7标记的兔抗猪IgG Nogo-A
*标记的兔抗猪IgG Nogo R
*标记的兔抗大鼠IgG Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗兔IgM Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)
PE-Cy7标记的小鼠抗兔IgG phospho-BAD(pSer128)
Alexa Fluor 555标记的小鼠抗兔IgG Bak(BCL2 homologous antagonist/killer)
Alexa Fluor 647标记的小鼠抗兔IgG NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1)
Cy3标记的小鼠抗兔IgG NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible
PE-CY5标记的小鼠抗兔IgG Batroxobin
Cy5.5标记的小鼠抗兔IgG NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS
Alexa Fluor 350标记的小鼠抗兔IgG NPY ( Neuropeptide Y)
Alexa Fluor 488标记的小鼠抗兔IgG NR2B (Glutamate receptor)
Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠IgG NT-3
Alexa Fluor 647标记的兔抗小鼠IgG NT-4,NT-5
人N端中段骨钙素   48T
LRP-6(Human low-density lipoprotein-receptor-related protein) ELISA Kit  人低密度脂蛋白受体相关蛋白6   48T
VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit  人极低密度脂蛋白受体   48T
LDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit  人低密度脂蛋白受体   48T
HDL(Human High density lipoprotein) ELISA Kit  人高密度脂蛋白   48T
Alpha-GST(Human Alpha-glutathione S-transferases) ELISA Kit  人α*S转移酶   48T
GSH-Px kit(human)  人*过氧化物酶elisa试剂盒   96T
Hcy(Human Homocysteic acid) ELISA Kit  人同型半*   48T
FFA(Human free fatty acids) ELISA Kit  人游离脂肪酸   48T
ON(Human osteonectin) ELISA Kit  人骨粘连蛋白   48T
FA(Human Folic acid) ELISA Kit  人*   96T
ET(Human endotoxin) ELISA Kit  人内毒素   48T
PPAR- Gamma(Human Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit  人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ   48T
CsA(Human Cyclosporine A) ELISA Kit  人*A   48T
GFAP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人神经胶质纤维酸性蛋白   48T
15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit  人15脂加氧酶   48T
CETP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人*酯转移蛋白   48T
LTC4(Human Leukotriene C4) ELISA Kit  人白三烯C4   48T
Cyt-C(Human Cytochrome-C) ELISA Kit  人*   48T
LPL(Human lipoprotein lipase) ELISA Kit  人脂蛋白脂酶   48T
GP-II(Human Glycogen phosphorylase II) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶II   48T
GP-MM(Human Glycogen phosphorylase MM) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶MM   48T
GP-BB(Human Glycogen phosphorylase BB) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶BB   48T
Lp- Alpha(Human lipoprotein Alpha) ELISA Kit  人脂蛋白α   48T
Cr(Human Crosslaps) ELISA Kit  人骨胶原交联   48T
C I CP(Human cross-linked C-opeptides of Type I collagen) ELISA Kit  人Ⅰ型前胶原C末端