【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：兔气管上皮细胞操作步骤

2.组织来源：气管组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔气管上皮细胞分离自气管组织；气管（Trachea），呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性，软骨为“C”字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。气管上皮是气道与外界环境接触的*道防线，不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子从而参与气道炎症及免疫反应。体外培养的原代气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，因此，在基础及临床研究中极为重要。

本公司的兔气管上皮细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

M199、FBS、上皮细胞生长添加剂、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
peptide
*标记的羊抗大鼠IgG Thymosin Alpha-1
PE-Cy3标记的羊抗大鼠IgG Caspase-12
PE-CY5标记的羊抗大鼠IgG Caspase-12(hunman)
APC标记的羊抗大鼠IgG TmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)
Alexa Fluor 350标记的羊抗大鼠IgG TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)
Alexa Fluor 488标记的羊抗大鼠IgG rh-TNF alpha protein GST Tagged
PE-Cy5.5标记的羊抗大鼠IgG TRA16
Cy3标记的羊抗大鼠IgG rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag)
Cy5标记的羊抗大鼠IgG E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein)
Cy5.5标记的羊抗大鼠IgG Tranthyretin
Cy7标记的羊抗大鼠IgG rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)
Alexa Fluor 555标记的羊抗大鼠IgG TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A)
Alexa Fluor 647标记的羊抗大鼠IgG TrK A.B.C
辣根过氧化物酶标记的羊抗豚鼠IgG active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit)
*标记的羊抗豚鼠IgG r-GST(Recombinant Glutathione S-T Ahents)
Cy5标记的羊抗豚鼠IgG CASP4(Caspase-4)
Cy5.5标记的羊抗豚鼠IgG Trk B
Cy7标记的羊抗豚鼠IgG GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8)
PE标记的羊抗豚鼠IgG Trk B
PE-Cy3标记的羊抗豚鼠IgG Trk C
PE-CY5标记的羊抗豚鼠IgG TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT)
APC标记的羊抗豚鼠IgG Caspase-8 (pro Mch5)
Alexa Fluor 350标记的羊抗豚鼠IgG TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT)
Alexa Fluor 488标记的羊抗豚鼠IgG TY3H ( Tyrosine Hydroxylase )
Alexa Fluor 555标记的羊抗豚鼠IgG 

PFKP(Human phosphofructokinase-plaet) ELISA Kit  人血小板型磷酸果糖激酶   48T
UGCG(Human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase) ELISA Kit  人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶   48T
Casp4(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人凋亡相关半*肽酶4   48T
PDXK(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人吡哆醛/吡哆醇*6激酶   48T
DPYSL2(human dihydropyrimidinase-like 2) ELISA Kit  人二氢嘧啶酶样2   48T
SGK2(Human serum/glucocorticoid regulated kinase 2) ELISA KIT  人血清/糖皮质激素调节激酶2   48T
MKK6(Human mitogen activated protein kinase kinase 6) ELISA Kit  人丝裂原活化蛋白激酶激酶6   48T
PDXP(Human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase) ELISA Kit  人吡哆醛/吡哆醇*6磷酸酶   48T
Tgtp(Human T-cell specific GTPase) ELISA Kit  人T细胞特异性鸟苷三磷酸酶   48T
FDFT1(Human farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1) ELISA Kit  人法尼基二磷酸法尼基转移酶1   48T
D-LDH(Human D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit  人D-乳酸脱氢酶   48T
Alpha1-AT(Human Alpha1-Antitrypsin) ELISA Kit  人α1抗*   48T
KLK 1(Human Kallikrein 1) ELISA Kit  人*1   48T
KLK 6(Human Kallikrein 6) ELISA Kit  人*6   96T
PaCoA(Human Phosphorylated acetyl CoA) ELISA Kit  人磷酸化乙酰*   48T
PGAM2(Human phosphoglycerate mutase 2) ELISA Kit  人磷酸甘油酸变位酶2   48T