1.产品名称：兔膀胱平滑肌细胞实验方法

2.组织来源：膀胱组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔膀胱平滑肌细胞分离自膀胱组织；膀胱是主要由平滑肌细胞组成的中空器官，膀胱平滑肌的舒张和收缩使得膀胱分别储存和排出尿液。膀胱平滑肌细胞表型的调控和可诱导一氧化氮合酶的表达与多种病理状况有关，包括膀胱功能障碍。研究表明，组织缺氧抑制膀胱平滑肌细胞的增殖，膀胱平滑肌细胞的分化依赖于膀胱上皮细胞释放的因子。膀胱平滑肌细胞外基质的分泌表型可通过细胞所经历的机械变形频率而改变。平滑肌是许多疾病中的共同路径，因此，了解在疾病发生及持续过程中平滑肌怎样变化，这是治疗方法取得进展的重要一步。膀胱壁由三层组织组成，由内而外为黏膜层、肌层和外膜。其中，肌层主要由平滑肌构成。膀胱平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱、尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。

本公司的兔膀胱平滑肌细胞采用*-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、平滑肌细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
PE-Cy3标记的羊抗鸡IgG CCR-1(CC chemokine receptor 1)
PE-CY5标记的羊抗鸡IgG CCR-3(CC chemokine receptor 3)
APC标记的羊抗鸡IgG CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)
Alexa Fluor 350标记的羊抗鸡IgG CCR-4(C-C chemokine receptor 4)
罗丹明标记的羊抗鸡IgG CCR-6/CD196 peptide
胶体金标记的羊抗鸡IgG CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide
FITC标记的羊抗鸡IgG CCR-7(CC chemokine receptor 7)
碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗鸡IgG CXCL10/IP-10
辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG VEGF(Vascular endothelial growth factor)
碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗人IgG CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)
罗丹明标记的羊抗人IgG ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)
Cy7标记的羊抗人IgG CD138/Syndecan-1
PE标记的羊抗人IgG CD146/MCAM
*标记的羊抗人IgG ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)
Alexa Fluor 555标记的羊抗人IgG CD14(cluster of differentiation antigen 14)
Alexa Fluor 647标记的羊抗人IgG CD28
PE-Cy5.5标记的羊抗人IgG CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)
PE-Cy7标记的羊抗人IgG CD177/NB1 peptide
Cy3标记的羊抗人IgG CD24
Cy5标记的羊抗人IgG CD2AP (CD2-associated protein)
Cy5.5标记的羊抗人IgG CD33/Siglec-3(mouse ret)
PE-Cy3标记的羊抗人IgG CD34
PE-CY5标记的羊抗人IgG CD38(mouse, rat)
APC标记的羊抗人IgG CD38(human)
释放酶10   48T
PLC Gamma1(Human Phospholipase C Gamma1) ELISA Kit  人磷酯酶Cγ链   48T
NA(Human neuraminidase) ELISA Kit  人神经氨酸酶   48T
PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C) ELISA Kit  人磷酯酰肌醇特异性磷酯酶C   48T
PLC(Human Phospholipase C) ELISA Kit  人磷酯酶C   48T
Tyk-2(Human tyrosine kinase2) ELISA Kit  人*激酶2   48T
ICE(Human Interleukin 1 Beta converting enzyme) ELISA Kit  人白介素1β转换酶   48T
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit  人整合素连接激酶1   48T
CYP21B(Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase) ELISA Kit  人细胞色素P450c21B/21-羟化酶   48T
TdT(Human terminal deoxynucleotidyl transferase) ELISA Kit  人末端脱氧核苷酸转移酶   48T
IDO(Human indoleamine 2,3-dioxygenase) ELISA Kit  人吲哚胺2,3-双加氧酶   48T
PRSS(Human serine protease) ELISA Kit  人*蛋白酶   48T
Syk(Human spleen tyrosine kinase) ELISA Kit  人脾脏*激酶   48T
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit  人*/*蛋白磷酸酶   48T
IRAK(Human interleukin receptor associated kinase) ELISA Kit  人白介素受体相关激酶   48T
UK(Human urokinase) ELISA Kit  人*   48T
PCK(Human phosphoenolpyruvate carboxykinase) ELISA Kit  人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶   48T
Human trypsin ELISA Kit   人*