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干细胞实验内标法的操作

时间:2017-10-13      阅读:399

干细胞实验内标法的操作:
① 将已知量的内标样加入标准样品,制成混合标样,并配制一系列的已知浓度的工作标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。
② 注入色谱柱,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值。
③ 根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系,即W=f×A,制成标准曲线。
④ 将已知量的内标样加入未知样品,注入色谱柱,得到欲测组分的响应值。
⑤ 根据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。
注意事项
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
干细胞MODS    间充质干细胞成骨细胞分化生长添加物    5 ml
MADS    间充质干细胞脂肪细胞分化生长添加物    5 ml
MSCGS    间充质干细胞生长添加物    5 ml
MSCGS-2    间充质干细胞生长添加物-无血清    5 ml
MSCGS-acf    间充质干细胞生长添加物-无动物成分    5 ml
MCDS    间充质干细胞软骨细胞分化生长添加物    5 ml
MEpiCGS   上皮细胞生长添加物    5 ml
FBS    胎牛血清    10 ml
FBS    胎牛血清    25 ml
T/E    */EDTA消化液    100 ml
TNS    *中和液    100 ml
NECDS     非酶细胞裂解液    100 ml
CFM    细胞冻存液    50 ml
SF-CFM    无血清细胞冻存液    50 ml
TB    台盼蓝    50 ml
DPBS    磷酸盐缓冲注    500 ml
HBSS    *    500 ml
PLL    多聚赖氨酸 1 mg/ml    1 ml
PLL    多聚赖氨酸10 mg/ml    1 ml
FBS    胎牛血清    500 ml
P/S    */*溶液    5 ml
P/S    */*溶液    100 ml
AMS    抗真菌溶液    50 ml
ABAMS    抗霉菌溶液    50 ml
CCGW    细胞培养超纯水    500 ml
MDS    肌细胞分离液    100 ml
BPE    牛脑垂体提取物    25 mg
BPE    牛脑垂体提取物    100 mg
ITS    胰岛素铁硒传递蛋白 100x    10 ml
L-Gue    左旋*溶液 200 mM    100 ml
NEAA    非必需氨基酸 100X    100 ml干细胞

 

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